自動(dòng)掃描型分光光度計(jì)計(jì)量檢定中若干問(wèn)題的分析與對(duì)策

關(guān)鍵詞：自動(dòng)掃描型 UV-1800SPC  分光光度計(jì)

    分光光度計(jì)是實(shí)驗(yàn)室常用的精密儀器，在醫(yī)院中有著廣泛的應(yīng)用，主要用于測(cè)量溶液的濃度。分光光度計(jì)屬于計(jì)量強(qiáng)制檢定項(xiàng)目，檢定周期應(yīng)<1年。目前的檢定規(guī)程為中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程JJG 178-2007“紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計(jì)檢定規(guī)程”。該規(guī)程對(duì)自動(dòng)掃描型儀器的檢定方法描述并不多，有些參數(shù)不可設(shè)置，在此介紹一些檢定技巧。

1分光光度計(jì)測(cè)量原理
    分光光度計(jì)的基本測(cè)量原理是朗伯-比爾定律， 即A=K2bC。意味著一定波長(zhǎng)的單色光通過(guò)溶液時(shí)，溶液對(duì)光的吸收度與溶液自身的濃度以及液層的厚度成正比。分光光度計(jì)通過(guò)光柵或棱鏡來(lái)生成不同波長(zhǎng)的單色光，通過(guò)待測(cè)溶液后，檢測(cè)出射光的強(qiáng)度，再經(jīng)過(guò)信號(hào)處理，即可得到溶液的吸光度或透射比。吸光度A與透射比T的關(guān)系為A=-LgT，通常需測(cè)量其中的一項(xiàng)。由于其分光能力很強(qiáng)，其波長(zhǎng)范圍可以達(dá)到數(shù)個(gè)nm，甚至更窄，從而提高了分析的靈敏度、準(zhǔn)確度和波長(zhǎng)范圍，使得分光光度計(jì)在化學(xué)分析中得到 廣泛的應(yīng)用。

2計(jì)量中的常見(jiàn)問(wèn)題與使用技巧
2.1波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的對(duì)比設(shè)定值
    波長(zhǎng)準(zhǔn)確度的測(cè)量在規(guī)程中了9種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可供選擇。由于濾光片使用方便，價(jià)格低廉，成為應(yīng)用zui廣泛的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。通常采用氧化鈥濾光片，通過(guò)全波段掃描，找到其吸光度出現(xiàn)波谷的波長(zhǎng)，然后與給定值進(jìn)行比較，可得到波長(zhǎng)示值誤差的數(shù)值。需要說(shuō)明的是，雖然氧化鈥具有固定的參考波長(zhǎng)，但在實(shí)際計(jì)算中應(yīng)選用具有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)校準(zhǔn)資格的機(jī)構(gòu)校準(zhǔn)的 波長(zhǎng)為準(zhǔn)，并應(yīng)定期進(jìn)行校正。
2.2濾光片標(biāo)號(hào)的含義
    測(cè)量雜散光時(shí)，需要用到波長(zhǎng)分別為220nm、 360nm和420nm的截止濾光片。截止濾光片上印有編號(hào)，編號(hào)的數(shù)字x10即為標(biāo)稱(chēng)測(cè)試波長(zhǎng)。所以應(yīng)選擇 22號(hào)、36號(hào)和42號(hào)截止濾光片。截止濾光片類(lèi)似于一個(gè)高通濾波器，其截止波長(zhǎng)應(yīng)分別>225nm、365nm 和430nm[8]。同理，干涉濾光片也是以編號(hào)數(shù)字x10 作為標(biāo)稱(chēng)峰值波長(zhǎng)，中性濾光片以編號(hào)數(shù)字x10作為 標(biāo)稱(chēng)透射比。
2.3吸收池配套性
    分光光度計(jì)的吸收池是成對(duì)配套，分為玻璃和 石英兩種材質(zhì)。由于玻璃吸收紫外光，其適用波長(zhǎng)為 400~2000nm;石英適用波長(zhǎng)為180~3000nm。按照檢定規(guī)程，配對(duì)的吸收池透射比的差值<0.5%。為保證其配套性，2個(gè)吸收池盡量同時(shí)使用，注意保養(yǎng)。使用時(shí)樣品液應(yīng)達(dá)到2/3的高度，且注意不要溢出'使用完后用蒸餾水清洗同樣的次數(shù)，拭鏡紙單向擦干。一般使用1年后吸收池的配套性會(huì)變差，應(yīng)重新配對(duì)。
2.4基線平直度調(diào)整
基線平直度是指掃描透射比為100和0時(shí)基線傾斜 或彎曲的程度。如果基線的平直性差，就會(huì)使樣品的吸收光譜中各吸收峰之間的比值發(fā)生變化，給定性分析造成錯(cuò)誤。導(dǎo)致基線不平直的主要原因是儀器的光 學(xué)系統(tǒng)失調(diào)，兩光束不平衡。如儀器受震動(dòng)，光源位置變動(dòng)等都會(huì)引起光學(xué)系統(tǒng)故障(基線平直度要以吸光度表示)。有些設(shè)備對(duì)基線平直非常敏感，容易超出規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)，因此在進(jìn)行此項(xiàng)測(cè)量時(shí)要使機(jī)器充分預(yù)熱，光譜帶寬設(shè)為2 nm，并且在儀器遮光罩關(guān)閉后穩(wěn)定2 min后再進(jìn)行波長(zhǎng)掃描。
2.5光譜帶寬調(diào)整
    規(guī)程中對(duì)噪聲、漂移、zui小光譜帶寬和基線平直度幾個(gè)項(xiàng)目的測(cè)定需要調(diào)整光譜帶寬。光譜帶寬是由狹縫寬度決定，理論上，光柵型儀器當(dāng)狹縫寬度小于衍射寬度時(shí)，光譜帶寬由衍射寬度決定；當(dāng)狹縫寬度大于衍射寬度時(shí)，光譜帶寬由狹縫寬度決定。狹縫越小，得到的單色光越純，但光的強(qiáng)度降低。目前有很多儀器為固定光譜帶寬，而規(guī)程規(guī)定在測(cè)量時(shí)設(shè)置為2nm，固定光譜帶寬儀器可不設(shè)。事實(shí)上，當(dāng)光譜帶寬不能設(shè)置時(shí)，容易使光電流的噪聲偏大。
2.6掃描速度選擇
    進(jìn)行波長(zhǎng)zui大允許誤差的測(cè)量時(shí)，需要對(duì)氧化鈥濾光片進(jìn)行波長(zhǎng)掃描。為節(jié)省時(shí)間，設(shè)定波長(zhǎng)范圍只需包含所要同標(biāo)準(zhǔn)值對(duì)比的波峰波谷即可。首先要對(duì)照上一次的檢測(cè)報(bào)告或儀器說(shuō)明書(shū)明確儀器波長(zhǎng)重復(fù)性，設(shè)置使采樣間隔小于波長(zhǎng)重復(fù)性的掃描速度。如果不能設(shè)定采樣間隔，則應(yīng)設(shè)定掃描速度<120nm/ min。進(jìn)行基線平直度測(cè)量時(shí)，全波段掃描的速度應(yīng)選擇采樣間隔為1nm的速度，若不能設(shè)置，則可選擇 400~800nm/min。
2.7波長(zhǎng)分段與儀器級(jí)別
    在紫外、可見(jiàn)、近紅外分光光度計(jì)檢定規(guī)程中， 增加了對(duì)儀器的工作波長(zhǎng)及儀器性能級(jí)別的劃分。 其工作波長(zhǎng)分為A段、B段和C段。儀器性能從高到低分為4個(gè)級(jí)別,即I級(jí)、II級(jí)、III級(jí)、IV級(jí)。儀器的每一項(xiàng)計(jì)量指標(biāo)均應(yīng)根據(jù)級(jí)別劃分標(biāo)準(zhǔn)。因此，應(yīng)對(duì)照規(guī)程在計(jì)量證書(shū)中給出每項(xiàng)指標(biāo)在每個(gè)波段的儀器級(jí)別，以方便使用者對(duì)儀器性能有更好的判斷。
3光學(xué)器件的維護(hù)與保養(yǎng)
    光學(xué)器件忌灰塵和觸摸，要保證使用環(huán)境的清潔， 濾光片使用完后要及時(shí)放回暗盒中。如光學(xué)器件粘有少量灰塵，可用小功率吸塵器處理。當(dāng)環(huán)境濕度過(guò)大或 PM2.5含量過(guò)高，也會(huì)對(duì)測(cè)量準(zhǔn)確度造成影響。分光光度計(jì)屬于精密儀器應(yīng)盡量避免搬動(dòng)，以免造成光路的輕微改變，儀器不用時(shí)應(yīng)關(guān)閉電源，延長(zhǎng)其光源壽命。

4結(jié)語(yǔ)
    分光光度計(jì)的檢定是一項(xiàng)科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)和細(xì)致的工 作。由于該儀器是光學(xué)精密儀器，測(cè)量結(jié)果極易受到濕度、灰塵、振動(dòng)及霉斑等偶然因素的干擾，實(shí)踐中 要區(qū)分是分光光度計(jì)本身的問(wèn)題還是偶然因素導(dǎo)致的誤差等各種問(wèn)題，嚴(yán)格遵守檢定規(guī)程規(guī)定流程和檢測(cè)環(huán)境的要求正確使用、保養(yǎng)儀器。同時(shí)，加強(qiáng)對(duì)使用人員的培訓(xùn)也是保證儀器正常運(yùn)行、測(cè)量數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠的重要途徑。